Plasmide CRISPR d'Activation (h) P2X3: sc-402380-ACT

Le gène humain **P2RX3** code le récepteur **P2X3**, un canal cationique activé par l’ATP, fortement enrichi dans les neurones sensoriels périphériques, où il médie des courants dépolarisants rapides et une entrée de calcium en réponse aux nucléotides extracellulaires. P2X3 participe à la neurotransmission purinergique et intègre les signaux d’inflammation et de lésion tissulaire, reliant la libération extracellulaire d’ATP à l’excitabilité neuronale, à l’inflammation neurogène et à la communication synaptique dans les voies sensorielles. Une dérégulation de la signalisation P2X3 a été associée à des altérations du traitement nociceptif et à des phénotypes d’hypersensibilité sensorielle, faisant de **P2RX3** une cible utile pour étudier l’activation neuronale induite par un stimulus et les mécanismes des circuits liés à la douleur. Cette biologie est également pertinente pour des réseaux de signalisation plus larges impliquant les canaux ioniques et des voies adjacentes aux GPCR, qui convergent vers MAPK, la transcription dépendante du calcium et la modulation des fonctions des neurones sensoriels induite par les cytokines.

P2X3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de P2RX3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

P2X3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus P2RX3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription P2RX3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de P2X3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus P2RX3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de P2X3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie P2X3 dans les cellules tumorales présentant une expression de P2RX3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.