Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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p22-phox Plasmide Double Nickase (h): sc-400325-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- p22-phox Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il p22-phox Double Nickase Plasmid (h) e il p22-phox Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CYBA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: p22-phox Antibody (E-11): sc-271968
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
p22-phox Plasmide Double Nickase (h) | sc-400325-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
p22-phox Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400325-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYBA codifica p22-phox, una subunità transmembrana dell'ossidasi NADPH dei fagociti (NOX2), necessaria per il corretto assemblaggio e la stabilizzazione del nucleo catalitico gp91-phox/NOX2 e dei relativi fattori citosolici associati. Favorendo il trasferimento di elettroni all'ossigeno molecolare, p22-phox consente una generazione regolata di specie reattive dell'ossigeno (ROS), che contribuisce alla difesa antimicrobica, alla segnalazione redox e alle risposte infiammatorie. CYBA interagisce anche con altri enzimi della famiglia NOX, collegandosi così a vie più ampie dipendenti dai ROS che influenzano la funzione endoteliale, la segnalazione dell'immunità innata e le risposte allo stress ossidativo. L'alterazione genetica o funzionale di CYBA è associata a fenotipi di burst ossidativo compromesso ed è stata studiata nel contesto di immunodeficienza, infiammazione cronica e meccanismi di danno tissutale guidati dai ROS.
p22-phox Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYBA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYBA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYBA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYBA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.