p19 INK4D/CDKN2D Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419613

Panoramica

Il gene murino **Cdkn2d** codifica **p19 INK4D (CDKN2D)**, un inibitore delle chinasi ciclina-dipendenti che frena la progressione del ciclo cellulare legandosi a **CDK4/6** e limitando la fosforilazione di **RB** dipendente dalla ciclina D, imponendo così il checkpoint di **G1**. p19 INK4D integra segnali provenienti da vie mitogeniche e sensibili allo stress per coordinare proliferazione e differenziamento, in particolare nei tessuti in sviluppo e in quelli adulti, dove è necessario un controllo preciso delle cellule in ciclo. Una regolazione alterata della famiglia **INK4** e dell’asse **RB–E2F** è ampiamente associata a proliferazione deregolata e instabilità genomica, rendendo **CDKN2D** un nodo utile per studiare il controllo del ciclo cellulare in contesti rilevanti per la patologia. La perturbazione di **Cdkn2d** viene inoltre utilizzata per indagare le relazioni compensatorie tra le proteine INK4 e il loro impatto su programmi simil-senescenza e sull’impegno di linea cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO p19 INK4D/CDKN2D (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cdkn2d in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cdkn2d insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cdkn2d a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina p19 INK4D/CDKN2D.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cdkn2d per lo studio della segnalazione di p19 INK4D/CDKN2D, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cdkn2d critici per la funzione di p19 INK4D/CDKN2D
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cdkn2d per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cdkn2d. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal p19 INK4D/CDKN2D Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR p19 INK4D/CDKN2D (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cdkn2d per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cdkn2d definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.