Partículas Lentivirales de Activación (h) p14ARF/p16: sc-400018-LAC

CDKN2A codifica dos proteínas supresoras de tumores, p16INK4a y p14ARF, producidas a partir de marcos de lectura alternativos que restringen la progresión del ciclo celular y coordinan programas de senescencia. p16INK4a inhibe CDK4/6 para mantener a RB1 en un estado hipofosforilado, limitando la entrada en fase S dependiente de E2F, mientras que p14ARF estabiliza TP53 al antagonizar a MDM2 y promover la detención del ciclo celular o la apoptosis en respuesta al estrés oncogénico. A través de estas conexiones con los ejes de RB y p53, CDKN2A integra la señalización mitogénica con el control de puntos de control, las respuestas al daño del ADN y los cambios transcripcionales asociados al envejecimiento. La regulación alterada de CDKN2A se asocia con frecuencia a proliferación desregulada, senescencia deteriorada y fenotipos tumorigenéticos, lo que lo convierte en un nodo central para estudios mecanísticos en biología del cáncer y control del destino celular.

Las partículas de activación lentiviral p14ARF/p16 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CDKN2A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral p14ARF/p16 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CDKN2A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de p14ARF/p16. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CDKN2A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.