Plásmido CRISPR de Activación (h) Ox-LDL R-1: sc-402338-ACT

OLR1 codifica el receptor 1 de lipoproteínas de baja densidad oxidadas (Ox-LDL R-1/LOX-1), un receptor “scavenger” que se une e internaliza LDL oxidadas y otros ligandos modificados en la superficie celular. La señalización de LOX-1 influye en la activación endotelial, las respuestas al estrés oxidativo y programas transcripcionales inflamatorios, convergiendo con vías dependientes de NF-κB y procesos ligados a especies reactivas de oxígeno. Su expresión es inducible por estímulos proinflamatorios y por flujo alterado, lo que respalda su papel en la biología vascular, la formación de células espumosas en macrófagos y el manejo de lípidos. La actividad y expresión desreguladas de OLR1 se han asociado con mecanismos relacionados con la aterosclerosis y con contextos más amplios de enfermedades cardiometabólicas e inflamatorias, por lo que constituye un nodo útil para estudios mecanísticos.

Ox-LDL R-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de OLR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ox-LDL R-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus OLR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional OLR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ox-LDL R-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo OLR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ox-LDL R-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ox-LDL R-1 en células tumorales con expresión de OLR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.