Plásmido Doble Nickase (h) OTUB1: sc-407665-NIC

OTUB1 (desubiquitinasa OTU, unión al aldehído de ubiquitina 1) es una desubiquitinasa tipo proteasa de cisteína que escinde preferentemente cadenas de ubiquitina enlazadas por K48 y también puede inhibir enzimas E2 conjugadoras de ubiquitina, modelando así las salidas de la señalización por ubiquitina. A través de estas actividades, OTUB1 regula la estabilidad de las proteínas y la dinámica de señalización en vías que controlan la respuesta al daño del ADN, la progresión del ciclo celular y la señalización de estrés, incluida la modulación de componentes de la vía de p53 y de eventos de ubiquitinación asociados a la reparación. El ajuste dependiente de OTUB1 de la proteostasis dependiente de ubiquitina influye en nodos de señalización inmunitaria e inflamatoria y puede afectar el recambio de proteínas reguladoras clave. Se ha descrito una expresión o actividad desregulada de OTUB1 en múltiples contextos de cáncer y otros trastornos en los que la homeostasis de la ubiquitina y el mantenimiento del genoma están alterados, lo que respalda su utilidad como diana mecanística en investigaciones centradas en vías.

OTUB1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus OTUB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de OTUB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de OTUB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con OTUB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.