Plasmide CRISPR/Cas9 KO ORP150 (m): sc-419398

Présentation

Hyou1 code ORP150 (également appelée « hypoxia upregulated protein 1 »), une protéine chaperonne de la famille HSP70 résidente du réticulum endoplasmique (RE), qui soutient le repliement des protéines et le contrôle qualité en conditions d’hypoxie, de privation de glucose et d’autres stress cellulaires. ORP150 agit au sein des réseaux de protéostasie du RE, en coordination avec des voies de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) telles que PERK–eIF2α, IRE1–XBP1 et ATF6, afin de limiter l’accumulation de protéines mal repliées et de maintenir l’intégrité de la voie sécrétoire. Dans des modèles murins et des systèmes cellulaires, des modifications de l’activité d’ORP150 ont été associées à des mécanismes d’adaptation au stress influençant la survie cellulaire, l’inflammation et l’homéostasie métabolique. La dérégulation de la gestion du stress du RE et de la protéostasie est pertinente pour l’étude des lésions ischémiques, des maladies neurodégénératives et de la biologie du microenvironnement tumoral, où l’hypoxie et le stress protéotoxique sont marqués.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ORP150 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hyou1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hyou1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hyou1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ORP150.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hyou1 pour l'étude de la signalisation de ORP150, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hyou1 essentiels à la fonction de ORP150
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hyou1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ORP150 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ORP150 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hyou1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ORP150 plasmide HDR (m) et le ORP150 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hyou1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hyou1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.