ORP150 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419398

Panoramica

Hyou1 codifica ORP150 (nota anche come hypoxia upregulated protein 1), una chaperone della famiglia HSP70 residente nel reticolo endoplasmatico, che sostiene il ripiegamento proteico e il controllo qualità durante l’ipossia, la deprivazione di glucosio e altri stress cellulari. ORP150 opera all’interno delle reti di proteostasi del RE, coordinandosi con le vie della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR) quali PERK–eIF2α, IRE1–XBP1 e ATF6, per limitare l’accumulo di proteine mal ripiegate e mantenere l’integrità della via secretoria. In modelli murini e sistemi cellulari, un’alterata attività di ORP150 è stata collegata a meccanismi di adattamento allo stress che influenzano la sopravvivenza cellulare, l’infiammazione e l’omeostasi metabolica. La disregolazione della gestione dello stress del RE e della proteostasi è rilevante negli studi sul danno ischemico, la neurodegenerazione e la biologia del microambiente tumorale, in cui ipossia e stress proteotossico sono marcati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ORP150 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hyou1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hyou1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hyou1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ORP150.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hyou1 per lo studio della segnalazione di ORP150, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hyou1 critici per la funzione di ORP150
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hyou1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ORP150 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ORP150 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hyou1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ORP150 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ORP150 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hyou1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hyou1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.