ORMDL3 Double Nickase Plasmid (h): sc-403587-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ORMDL3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ORMDL3 Double-Nickase-Plasmid (h) und ORMDL3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ORMDL3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ORMDL3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403587-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ORMDL3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403587-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ORMDL3 (orosomucoid-like 3) ist ein Membranprotein des endoplasmatischen Retikulums, das die Sphingolipid-Biosynthese reguliert, indem es die Aktivität der Serin-Palmitoyltransferase moduliert und dadurch die Ceramid-Homöostase sowie lipidvermittelte Signalprozesse beeinflusst. Über seine Rolle im ER-Lipidstoffwechsel wirkt ORMDL3 auf ER-Stressantworten, den Calciumhaushalt und entzündliche Signalwege, die den Aktivierungszustand von Zellen prägen. Eine veränderte ORMDL3-Expression und damit verbundene Lipidungleichgewichte wurden mit Immundysregulation und Phänotypen der Atemwegsentzündung in Verbindung gebracht, weshalb ORMDL3 häufig in Studien zur Asthma-Anfälligkeit und zu verwandten entzündlichen Merkmalen untersucht wird. In humanen Zellmodellen bietet die gezielte Störung von ORMDL3 einen Ansatz, um zu analysieren, wie Sphingolipid-Flüsse mit zytokingesteuerten Programmen, der Membranzusammensetzung und stressadaptiven Signalwegen zusammenwirken.
ORMDL3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ORMDL3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ORMDL3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ORMDL3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ORMDL3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.