OPA1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401555-ACT

A OPA1 humana codifica uma GTPase do tipo dinamina incorporada à membrana mitocondrial interna, que governa a fusão mitocondrial, a arquitetura das cristas e a manutenção da organização de supercomplexos da cadeia respiratória. Por meio da coordenação com fatores de dinâmica mitocondrial como MFN1/2 e DRP1, a OPA1 sustenta a eficiência da fosforilação oxidativa, a estabilidade do DNA mitocondrial e a adaptação bioenergética ao estresse celular. A função da OPA1 cruza-se com a sinalização apoptótica ao regular a remodelação das cristas e a mobilização do citocromo c, conectando a estrutura mitocondrial às vias intrínsecas de morte celular. A desregulação patogênica de OPA1 está associada à fragmentação da rede mitocondrial e a fenótipos de neurodegeneração, incluindo a atrofia óptica autossômica dominante, tornando-a relevante para estudos de resiliência neuronal e disfunção metabólica.

OPA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OPA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OPA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OPA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OPA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OPA1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OPA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OPA1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OPA1 em células tumorais com expressão de OPA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.