Plasmide CRISPR d'Activation (h) OLIG2: sc-400670-ACT

OLIG2 code un facteur de transcription basique à motif hélice-boucle-hélice (bHLH) qui coordonne la spécification des lignages neuronaux, avec des rôles majeurs dans la mise en place du patron ventral du tube neural et l’engagement des programmes des précurseurs d’oligodendrocytes et des motoneurones. Via des réseaux transcriptionnels dépendants du stade de développement, OLIG2 s’articule avec des voies de signalisation développementales telles que SHH et Notch afin de réguler la prolifération des progéniteurs, le timing de la différenciation et les décisions de destinée gliale. Une expression dérégulée d’OLIG2 est fréquemment étudiée dans le contexte d’anomalies neurodéveloppementales et de la biologie des tumeurs cérébrales, où elle a été associée à une altération du contrôle des états cellulaires et de la capacité proliférative. En tant que régulateur définissant un lignage, OLIG2 constitue un nœud clé pour disséquer les circuits de régulation génique qui gouvernent le comportement des cellules souches/progénitrices neurales et la maturation oligodendrogliale.

OLIG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de OLIG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OLIG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus OLIG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription OLIG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OLIG2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus OLIG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OLIG2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OLIG2 dans les cellules tumorales présentant une expression de OLIG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.