Olfr303 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-434741-LAC

Olfr303 codifica un recettore olfattivo nel topo appartenente alla famiglia dei GPCR di classe A tipo rodopsina e si prevede che accoppi il legame degli odoranti alla segnalazione mediata da proteine G eterotrimeriche. Una volta attivati, i recettori olfattivi in genere innescano cascate di trasduzione mediate da cAMP che regolano i canali ionici a ingresso per nucleotidi ciclici e le risposte neuronali a valle dipendenti dal calcio, plasmando la codifica sensoriale e gli output comportamentali. Sebbene Olfr303 sia studiato principalmente nel contesto dell’olfatto, l’espressione ectopica di recettori olfattivi in tessuti non olfattivi è stata collegata a processi più ampi regolati dai GPCR, inclusa la modulazione degli stati di segnalazione cellulare e risposte di tipo chemiotattico. Queste caratteristiche rendono Olfr303 rilevante per studiare la logica della segnalazione GPCR, la biologia dei neuroni sensoriali e i flussi di lavoro di deorfanizzazione dei recettori.

Le particelle di attivazione lentivirale Olfr303 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Olfr303 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Olfr303 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Olfr303, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Olfr303. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Olfr303 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.