ODC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401055

Übersicht

ODC1 kodiert die Ornithin-Decarboxylase (ODC), das geschwindigkeitsbestimmende Enzym der Polyaminbiosynthese, das Ornithin zu Putrescin umsetzt und damit die Bildung von Spermidin und Sperm in unterstützt, die für DNA-Replikation, Chromatinorganisation und Translation benötigt werden. Die ODC-Aktivität wird streng durch antizymevermittelten Abbau reguliert und ist in den Aminosäurestoffwechsel, mTOR-gekoppelte Wachstumssignale und die Zellzyklusprogression eingebunden. Eine fehlregulierte Polyaminhomöostase und eine erhöhte ODC1-Expression sind häufig mit proliferativen Phänotypen, metabolischer Anpassung und onkogenen Transkriptionsprogrammen assoziiert, was ODC1 zu einem hilfreichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Wachstumskontrolle und Stressantworten macht. Eingriffe in ODC1 liefern zudem Erkenntnisse für die Forschung zu Apoptose, zur Pufferung von oxidativem Stress sowie zu Immun- oder Entzündungssignalen, bei denen Polyamine die Genexpression und die zelluläre Fitness modulieren.

Das ODC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ODC1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ODC1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ODC1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ODC-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ODC1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ODC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ODC1-Exone abzielen, die für die ODC-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ODC1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ODC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ODC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ODC1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ODC HDR-Plasmid (h) und ODC HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ODC1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ODC1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.