OC-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-434195

Übersicht

Onecut3 (OC-3) ist ein Homeobox-Transkriptionsfaktor der ONECUT-Familie in der Maus, der an spezifische DNA-Motive bindet, um während der Entwicklung Zellschicksalsentscheidungen und die Musterbildung von Geweben zu koordinieren. Er trägt zu genregulatorischen Programmen bei, die an Differenzierung, Morphogenese und der Aufrechterhaltung spezialisierter zellulärer Identitäten beteiligt sind, und integriert sich in umfassendere transkriptionelle Netzwerke, die die Organogenese steuern. Als nukleärer Regulator beeinflusst OC-3 nachgeschaltete Signalwege, die die Festlegung von Zelllinien und die Reifung kontrollieren, und ist damit relevant für Studien zur Entwicklungsbiologie und zur epigenetischen Kontrolle der Transkription. Fehlregulierte, mit Onecut3 assoziierte transkriptionelle Programme wurden in der Literatur mit veränderten Differenzierungszuständen und krankheitsrelevanten Phänotypen in Modellsystemen in Verbindung gebracht, in denen Entwicklungswege gestört sind.

Das OC-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Onecut3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Onecut3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Onecut3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die OC-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Onecut3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der OC-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Onecut3-Exone abzielen, die für die OC-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Onecut3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom OC-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom OC-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Onecut3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das OC-3 HDR-Plasmid (m) und OC-3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Onecut3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Onecut3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.