OC-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404081-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das OC-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- OC-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und OC-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ONECUT2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
OC-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404081-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
OC-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404081-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ONECUT2 kodiert den Transkriptionsfaktor OC-2, ein Mitglied der ONECUT-Homeobox-Familie, das an DNA bindet und während der Entwicklung sowie der Gewebeausdifferenzierung linienspezifische Genprogramme reguliert. OC-2 beeinflusst Transkriptionsnetzwerke, die an der Bestimmung des Zellschicksals, der epithelialen Identität sowie an metabolischen und sekretorischen Funktionen beteiligt sind, mit nachgeschalteten Effekten auf Proliferation und Migration. Eine dysregulierte ONECUT2-Expression und veränderte regulatorische OC-2-Schaltkreise wurden in mehreren Tumorkontexten beschrieben, in denen OC-2 onkogene Transkriptionszustände und die zelluläre Plastizität umgestalten kann. Als nukleärer Regulator bietet OC-2 einen nützlichen Ansatzpunkt zur Untersuchung der Enhancer‑Promotor-Kontrolle, der chromatinabhängigen Transkription und der Umverdrahtung von Signalwegen in krankheitsrelevanten Modellen.
OC-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ONECUT2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ONECUT2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ONECUT2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ONECUT2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.