OBCAM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405750

Descripción general

OPCML codifica OBCAM, una molécula de adhesión celular de la superfamilia de las inmunoglobulinas anclada a glicosilfosfatidilinositol (GPI), enriquecida en la superficie celular, donde favorece el reconocimiento célula–célula y la arquitectura tisular. OBCAM participa en la señalización dependiente de contacto organizando microdominios de membrana y modulando vías asociadas a receptores tirosina cinasa e integrinas que influyen en la dinámica del citoesqueleto, la migración y programas de supervivencia. En biología humana, las alteraciones en la expresión y la regulación epigenética de OPCML/OBCAM se han vinculado con una adhesión alterada y una señalización de crecimiento aberrante en múltiples contextos tumorales, así como con cambios en la conectividad neuronal. Estas propiedades hacen de OPCML un nodo útil para estudiar la transducción de señales dependiente de la adhesión, la compartimentalización de membrana y fenotipos impulsados por el microambiente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO OBCAM (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen OPCML en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del OPCML junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de OPCML tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína OBCAM.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en OPCML para la investigación de la señalización de OBCAM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de OPCML críticos para la función de OBCAM
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de OPCML para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido OBCAM CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido OBCAM CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus OPCML. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR OBCAM (h) y el plásmido HDR OBCAM (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología OPCML para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana OPCML definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.