Particules Lentivirales d'Activation (m) OAZ: sc-430124-LAC

Zfp423 code le régulateur transcriptionnel OAZ (également appelé ZNF423), une protéine à doigts de zinc multiples qui agit comme une plateforme de liaison à l’ADN, intégrant les signaux du développement dans des programmes d’expression génique spécifiques de certains types cellulaires chez la souris. OAZ participe à des réseaux transcriptionnels liés au neurodéveloppement et à l’engagement de la lignée adipocytaire, et a été impliqué dans des interactions avec des voies telles que BMP/SMAD ainsi que dans le contrôle transcriptionnel associé à la différenciation. En coordonnant les interactions entre enhancers et promoteurs, Zfp423 contribue à réguler les transitions d’état des progéniteurs, la spécification du destin cellulaire et la maturation dans de multiples tissus. Une activité dérégulée de Zfp423/OAZ est donc pertinente pour l’étude des troubles du développement, des altérations de la différenciation et des modifications, associées aux maladies, des circuits transcriptionnels.

Les particules d'activation lentivirales OAZ (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Zfp423 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales OAZ (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Zfp423, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de OAZ. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Zfp423 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.