Plasmide CRISPR d'Activation (m) OAZ: sc-430124-ACT

Le gène murin Zfp423 code le régulateur transcriptionnel multi-doigts de zinc OAZ, une protéine liant l’ADN qui intègre des signaux développementaux pour contrôler la spécification des lignages et les programmes de différenciation. OAZ participe à des réseaux transcriptionnels liés à la signalisation BMP/SMAD et interagit avec des cofacteurs qui modulent l’expression génique neuronale et adipocytaire, influençant les décisions de destinée cellulaire et la maturation. Dans le système nerveux, Zfp423 est impliqué dans le développement du cervelet et la mise en place des patrons neuronaux, tandis que dans les tissus métaboliques il contribue à l’adipogenèse et à l’homéostasie énergétique. La dérégulation des programmes transcriptionnels associés à Zfp423 est donc pertinente dans des modèles de défauts neurodéveloppementaux et de phénotypes métaboliques où l’altération de la différenciation et le dialogue croisé des voies de signalisation constituent des mécanismes clés.

OAZ Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Zfp423 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OAZ Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Zfp423 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Zfp423, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OAZ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Zfp423 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OAZ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OAZ dans les cellules tumorales présentant une expression de Zfp423 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.