Plasmide CRISPR/Cas9 KO OAT3 (m): sc-422696
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- OAT3 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique OAT3, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: OAT3 Antibody (3C11): sc-293264
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO OAT3 (m) | sc-422696 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Slc22a8 code le transporteur d’anions organiques 3 (OAT3), un transporteur d’absorption polyspecifique situé sur la membrane basolatérale, qui médie l’import cellulaire de divers métabolites endogènes et d’anions organiques xénobiotiques. Dans le tubule proximal rénal de la souris, OAT3 soutient une sécrétion vectorielle en couplant l’absorption depuis le sang aux transporteurs d’efflux apicaux situés en aval, modulant ainsi la clairance rénale et l’exposition systémique à de nombreuses petites molécules. En influençant l’échange d’anions organiques et la gestion intracellulaire des métabolites, OAT3 contribue à l’homéostasie des solutés et s’inscrit à l’interface de voies impliquées dans le transport tubulaire, l’élimination des toxines urémiques et la susceptibilité à la néphrotoxicité. Une activité altérée d’OAT3 a été impliquée dans des mécanismes de lésion rénale et dans la variabilité pharmacocinétique, faisant de Slc22a8 un locus utile pour modéliser des phénotypes dépendants des transporteurs.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OAT3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc22a8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc22a8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc22a8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OAT3.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc22a8 pour l'étude de la signalisation de OAT3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Slc22a8 essentiels à la fonction de OAT3
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc22a8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le OAT3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le OAT3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc22a8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le OAT3 plasmide HDR (m) et le OAT3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc22a8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc22a8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.