Nurr1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400289-NIC

NR4A2 codifica Nurr1, un fattore di trascrizione appartenente alla famiglia dei recettori nucleari orfani, che regola programmi genici coinvolti nella differenziazione neuronale, nell'omeostasi mitocondriale e nelle risposte cellulari allo stress. Nurr1 coordina reti trascrizionali con altri recettori nucleari e co-regolatori per modulare la segnalazione legata alla dopamina, l'espressione di geni infiammatori e le vie di sopravvivenza cellulare. Un'alterata attività di NR4A2 è stata collegata a una disregolazione della segnalazione neuro-immune e a un mantenimento compromesso dei fenotipi dopaminergici, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio della neurodegenerazione e della disfunzione neuronale associata all'infiammazione. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di NR4A2 consente di indagare i meccanismi di controllo trascrizionale nello sviluppo neurale e nelle risposte adattative allo stress.

Nurr1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NR4A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NR4A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NR4A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NR4A2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.