Nup37 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409458-ACT

NUP37 codifica Nup37, una subunità centrale del complesso Nup107–160 che funge da impalcatura per l’assemblaggio del complesso del poro nucleare (NPC) e sostiene il trasporto nucleocitoplasmatico selettivo. Contribuendo alla biogenesi e alla permeabilità dell’NPC, Nup37 influenza il traffico di RNA e proteine, la progressione del ciclo cellulare e i programmi di regolazione del genoma che dipendono da un’importazione/esportazione nucleare controllata. L’alterazione dell’espressione o la perturbazione delle nucleoporine è associata a difetti nella fedeltà mitotica, nel controllo trascrizionale e nelle risposte allo stress, collegando la disfunzione dell’NPC a fenotipi proliferativi e dello sviluppo. NUP37 è pertanto rilevante per studiare come l’architettura del trasporto nucleare si interfacci con la regolazione della cromatina e con vie di segnalazione frequentemente deregolate in stati cellulari associati al cancro.

Nup37 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NUP37 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nup37 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NUP37 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NUP37, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nup37. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NUP37 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nup37 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nup37 nelle cellule tumorali con espressione di NUP37 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.