Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nup37: sc-409458-ACT

NUP37 code pour Nup37, une sous-unité centrale du complexe Nup107–160 qui sert d’échafaudage à l’assemblage du complexe du pore nucléaire (NPC) et soutient le transport nucléocytoplasmique sélectif. En contribuant à la biogenèse du NPC et à sa perméabilité, Nup37 influence le trafic des ARN et des protéines, la progression du cycle cellulaire et des programmes de régulation du génome qui dépendent d’une importation/exportation nucléaires finement contrôlées. Une expression altérée ou des perturbations des nucléoporines sont associées à des défauts de fidélité mitotique, de contrôle transcriptionnel et de réponses au stress, reliant ainsi la dysfonction du NPC à des phénotypes prolifératifs et développementaux. NUP37 est donc pertinent pour étudier comment l’architecture du transport nucléaire s’articule avec la régulation de la chromatine et des voies fréquemment dérégulées dans des états cellulaires liés au cancer.

Nup37 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NUP37 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nup37 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NUP37 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NUP37, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nup37. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NUP37 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nup37 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nup37 dans les cellules tumorales présentant une expression de NUP37 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.