Plásmido CRISPR de Activación (m) Nup133: sc-433405-ACT

Nup133 de ratón codifica un componente estructural central del complejo del poro nuclear (NPC), dentro del subcomplejo Nup107–160, que actúa como andamiaje para el ensamblaje del poro nuclear y sostiene el transporte nucleocitoplasmático. Al contribuir a organizar la arquitectura del NPC, Nup133 influye en el tráfico de ARN y proteínas, la progresión del ciclo celular y la dinámica de la envoltura nuclear, incluida su reconstitución tras la mitosis. La alteración de la composición del NPC puede modificar programas globales de expresión génica debido a la interrupción del transporte de factores de transcripción y de la maquinaria de procesamiento de ARN. Como nucleoporina central, Nup133 se estudia con frecuencia en contextos que vinculan el transporte nuclear y la integridad de la envoltura nuclear con fenotipos del desarrollo y respuestas celulares al estrés.

Nup133 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Nup133 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nup133 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Nup133 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Nup133, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nup133. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Nup133 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nup133 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nup133 en células tumorales con expresión de Nup133 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.