Nucling Plasmide Double Nickase (h): sc-406671-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nucling Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Nucling Double Nickase Plasmid (h) e il Nucling Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira UACA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Nucling Antibody (A-5): sc-515005
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nucling Plasmide Double Nickase (h) | sc-406671-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nucling Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406671-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UACA codifica Nucling, una proteina nucleare implicata nella regolazione della segnalazione apoptotica e delle risposte cellulari allo stress, con ruoli descritti nel coordinare eventi nucleari che influenzano le decisioni di sopravvivenza della cellula. Nucling è stata associata alla modulazione di programmi trascrizionali legati a NF-κB e di altre vie di trasduzione del segnale che collegano stimoli infiammatori all’apoptosi. Alterazioni dell’espressione di UACA sono state osservate in diversi contesti rilevanti per la malattia, inclusi il cancro e condizioni associate al sistema immunitario, in cui una disregolazione della morte cellulare e della segnalazione di stress contribuisce alla patogenesi. Di conseguenza, UACA/Nucling è spesso studiata nei meccanismi dell’apoptosi indotta da stress, del controllo trascrizionale e del crosstalk tra vie di segnalazione che influenzano l’omeostasi cellulare.
Nucling Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UACA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UACA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UACA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UACA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.