Nucling Double Nickase Plasmid (h): sc-406671-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nucling Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nucling Double-Nickase-Plasmid (h) und Nucling Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf UACA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nucling: sc-515005
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nucling Double Nickase Plasmid (h) | sc-406671-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nucling Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406671-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UACA kodiert Nucling, ein nukleäres Protein, das an der Regulation apoptotischer Signalwege und zellulärer Stressantworten beteiligt ist und dem eine Rolle bei der Koordination nuklearer Prozesse zugeschrieben wird, die Zellschicksalsentscheidungen zugunsten von Überleben oder Zelltod beeinflussen. Nucling wird mit der Modulation NF-κB-bezogener Transkriptionsprogramme sowie weiterer Signaltransduktionswege in Verbindung gebracht, die entzündliche Signale mit Apoptose verknüpfen. Eine veränderte UACA-Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beobachtet, darunter Krebs und immunassoziierte Erkrankungen, bei denen fehlregulierte Zelltod- und Stresssignalgebung zur Pathogenese beitragen. Entsprechend wird UACA/Nucling häufig im Zusammenhang mit Mechanismen stressinduzierter Apoptose, transkriptioneller Kontrolle und dem Crosstalk zwischen Signalwegen untersucht, der die zelluläre Homöostase beeinflusst.
Nucling Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des UACA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von UACA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die UACA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit UACA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.