NT-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402291

Übersicht

Das menschliche NTF4-Gen kodiert Neurotrophin-4 (NT-4), einen sezernierten Wachstumsfaktor aus der Neurotrophin-Familie, der primär über den TrkB-(NTRK2)-Rezeptor signalisiert und dabei die MAPK/ERK-, PI3K/AKT- und PLCγ-Signalwege aktiviert. NT-4 unterstützt das neuronale Überleben, das Neuritenwachstum, synaptische Plastizität und die aktivitätsabhängige Aufrechterhaltung neuronaler Schaltkreise; zudem werden zusätzliche Funktionen in sensorischen Systemen und bei der peripheren Innervation beschrieben. Eine Fehlregulation der Neurotrophin–TrkB-Signalübertragung wird mit Neurodegeneration, neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und veränderter synaptischer Funktion in Verbindung gebracht, wodurch NTF4 ein relevantes Ziel für mechanistische Studien zur neuronalen Konnektivität und trophischen Unterstützung darstellt. Die NTF4-Expression und die Aktivität des NT-4/TrkB-Signalwegs werden außerdem in Modellen von Verletzungsreaktionen und stressbedingtem zellulärem Remodeling untersucht.

Das NT-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NTF4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NTF4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NTF4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NT-4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NTF4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NT-4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NTF4-Exone abzielen, die für die NT-4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NTF4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NT-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NT-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NTF4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NT-4 HDR-Plasmid (h) und NT-4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NTF4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NTF4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.