Plasmide CRISPR/Cas9 KO NRAMP 1 (h): sc-402423

Présentation

SLC11A1 code pour NRAMP1, un transporteur de métaux divalents couplé aux protons, principalement associé aux membranes endosomales et phagosomales des cellules myéloïdes, où il régule les flux de Fe²⁺ et de Mn²⁺ et façonne la disponibilité des métaux au sein des compartiments contenant des agents pathogènes. En contrôlant la composition métallique intravésiculaire, NRAMP1 influence les programmes effecteurs antimicrobiens, l’équilibre rédox et la signalisation de l’immunité innée, qui croisent les voies inflammatoires et le traitement des antigènes. Des variations génétiques ou une expression altérée de SLC11A1 ont été associées à des différences de sensibilité aux infections intracellulaires et à une modulation des phénotypes inflammatoires, ce qui en fait un locus utile pour les études sur les interactions hôte–pathogène et la régulation immunitaire. Dans les modèles cellulaires humains, la fonction de NRAMP1 est souvent étudiée dans le contexte de l’activation des macrophages, de la maturation du phagosome et des mécanismes de privation de nutriments qui influencent la persistance microbienne.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NRAMP 1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC11A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC11A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC11A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NRAMP 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC11A1 pour l'étude de la signalisation de NRAMP 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC11A1 essentiels à la fonction de NRAMP 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC11A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NRAMP 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NRAMP 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC11A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NRAMP 1 plasmide HDR (h) et le NRAMP 1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC11A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC11A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.