NQO2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402200-ACT

ヒトNQO2（NRH:キノン酸化還元酵素2）遺伝子は、細胞質に局在するフラボタンパク質をコードしており、キノンおよび関連する求電子性化合物の二電子還元を触媒することで、細胞内のレドックスバランスや解毒能に影響を与えます。キノンのレドックスサイクリングや活性酸素種（ROS）産生を調節することにより、NQO2は酸化ストレス応答、異物代謝、ならびにより広範なNAD(P)H依存性レドックスネットワークと交差します。NQO2の発現や活性の変化は、代謝ストレス、炎症、求電子性化合物による損傷に対する細胞感受性と関連する表現型と結び付けられており、ストレス適応の機構研究において重要な対象となります。がん生物学や神経生物学の研究では、NQO2はしばしば、レドックス恒常性、DNA損傷感受性、ならびに求電子性代謝産物によって駆動されるシグナル伝達変化の観点から検討されます。

NQO2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NQO2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NQO2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NQO2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNQO2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NQO2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNQO2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNQO2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNQO2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNQO2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。