NQO2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402200-ACT

Humanes NQO2 (NRH:Chinon-Oxidoreduktase 2) kodiert ein zytosolisches Flavoprotein, das die Zwei-Elektronen-Reduktion von Chinonen und verwandten Elektrophilen katalysiert und dadurch das zelluläre Redoxgleichgewicht sowie die Entgiftungskapazität beeinflusst. Durch die Modulation des Chinon-Redoxzyklus und der Bildung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) ist NQO2 in oxidative Stressantworten, den Xenobiotika-Stoffwechsel und umfassendere NAD(P)H-abhängige Redoxnetzwerke eingebunden. Veränderte NQO2-Expression und -Aktivität wurden mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die mit metabolischem Stress, Entzündung und einer erhöhten zellulären Anfälligkeit für elektrophil-vermittelte Schäden einhergehen, was NQO2 für mechanistische Studien zur Stressadaptation relevant macht. In der Krebsbiologie und der neurobiologischen Forschung wird NQO2 häufig im Kontext der Redoxhomöostase, der Empfindlichkeit gegenüber DNA-Schäden und signalwegbezogener Veränderungen untersucht, die durch elektrophile Metaboliten ausgelöst werden.

NQO2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NQO2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NQO2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NQO2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NQO2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NQO2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NQO2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NQO2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NQO2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NQO2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.