NPC1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403252-NIC

NPC1 codifica la proteina della malattia di Niemann-Pick di tipo C1, un trasportatore di membrana del compartimento endosomiale tardivo/lisosomiale che coordina il traffico intracellulare di colesterolo e glicolipidi. Interagendo con NPC2 e regolando l’uscita degli steroli dai lisosomi verso altre membrane, NPC1 sostiene l’omeostasi lipidica, la composizione delle membrane e la segnalazione a valle legata alla dinamica endosoma–lisosoma e all’autofagia. L’alterazione della funzione di NPC1 provoca accumulo di lipidi nei lisosomi e fenotipi di stress cellulare, e diverse varianti sono associate alla malattia di Niemann-Pick di tipo C e, più in generale, a ricerche sulla neurodegenerazione e sul metabolismo. NPC1 è quindi ampiamente studiata nei pathway che regolano la funzione lisosomiale, i siti di contatto tra organelli e la segnalazione dipendente dal colesterolo.

NPC1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NPC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NPC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NPC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NPC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.