Nop56 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404035-ACT

O NOP56 humano codifica a Nop56, um componente central essencial do nucléolo dos pequenos ribonucleoproteínas nucleolares de caixa C/D (snoRNPs), que orientam a 2′-O-metilação e o processamento do pré-rRNA durante a biogênese ribossomal. Por meio de suas interações com a fibrilarina e outros fatores de snoRNP, a Nop56 sustenta a maturação dos rRNAs 18S e 28S e a montagem adequada das subunidades ribossomais, ligando-a à capacidade translacional global e à homeostase nucleolar. A perturbação da biogênese ribossomal e das vias de estresse nucleolar pode alterar o controle do ciclo celular e a proteostase, tornando a função do NOP56 relevante para estudos de regulação do crescimento e adaptação ao estresse. O NOP56 também está implicado em mecanismos neurodegenerativos associados à expansão de repetições na ataxia espinocerebelar tipo 36 (SCA36), o que motiva trabalhos mecanísticos sobre metabolismo de RNA e disfunção nucleolar.

Nop56 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOP56 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nop56 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOP56 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOP56, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nop56. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOP56 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nop56 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nop56 em células tumorais com expressão de NOP56 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.