Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nogo (m): sc-427106
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Nogo Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Nogo, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Nogo Antibody (C-4): sc-271878
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nogo (m) | sc-427106 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Rtn4 code Nogo, une protéine de la famille des réticulons associée au réticulum endoplasmique (RE), qui façonne les membranes tubulaires du RE et contribue à l’homéostasie des organites dans les neurones et les cellules gliales. Les isoformes de Nogo influencent également la croissance des neurites et la plasticité synaptique en modulant la dynamique du cytosquelette et des voies de signalisation liées au guidage axonal et à la régénération. Dans le système nerveux central, l’inhibition de l’extension des neurites médiée par Nogo est pertinente pour comprendre les mécanismes qui limitent le remodelage neuronal après une lésion et au cours de la neurodégénérescence. Rtn4/Nogo chez la souris est donc largement étudié dans des modèles portant sur le contrôle de la croissance axonale, la signalisation associée à la myélinisation et les réponses au stress couplées à la structure du RE.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nogo (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rtn4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rtn4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rtn4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nogo.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rtn4 pour l'étude de la signalisation de Nogo, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Rtn4 essentiels à la fonction de Nogo
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rtn4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Nogo plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Nogo plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rtn4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Nogo plasmide HDR (m) et le Nogo (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rtn4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rtn4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.