NMT1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421916
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- NMT1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico NMT1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NMT1 Anticuerpo (E-9): sc-393702
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
NMT1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421916 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino **Nmt1** codifica la **N-miristoiltransferasa 1 (NMT1)**, una enzima clave que cataliza la **N-miristoilación** de proteínas con una glicina en el extremo N-terminal, tanto de manera co- como postraduccional. Esta modificación lipídica regula la asociación a membranas, la estabilidad proteica y la propagación de señales en diversos sustratos, influyendo así en procesos como el tráfico vesicular, la dinámica del citoesqueleto, la apoptosis y la señalización inmunitaria innata. La actividad de NMT1 se entrecruza con vías controladas por quinasas de la familia Src y pequeñas GTPasas, modulando el crecimiento celular y las respuestas al estrés. La miristoilación proteica desregulada se ha vinculado con estados de señalización oncogénica y con fenotipos inmunitarios y neuronales alterados, lo que convierte a **Nmt1** en un nodo valioso para estudios mecanísticos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO NMT1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nmt1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nmt1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nmt1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NMT1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nmt1 para la investigación de la señalización de NMT1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Nmt1 críticos para la función de NMT1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nmt1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido NMT1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido NMT1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nmt1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NMT1 (m) y el plásmido HDR NMT1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nmt1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nmt1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.