Plásmido Doble Nickase (h) NMDAε4: sc-401683-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)NMDAε4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NMDAε4 (h) y el plásmido de doble nickasa NMDAε4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GRIN2D. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NMDAε4 Anticuerpo (G-10): sc-17822
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) NMDAε4 | sc-401683-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) NMDAε4 | sc-401683-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIN2D codifica la subunidad del receptor NMDA humano NMDAε4 (GluN2D), un componente de canal iónico regulado por ligando que se ensambla con GluN1 para formar receptores funcionales de N-metil-D-aspartato. NMDAε4 contribuye a la transmisión sináptica glutamatérgica al regular la entrada de Ca²⁺, la cinética de apertura/cierre (gating) del receptor y la señalización posterior dependiente de la actividad que determina el desarrollo neuronal y la excitabilidad de los circuitos. Mediante su acoplamiento a vías dependientes de calcio, influye en la plasticidad sináptica, los programas de transcripción y las respuestas de estrés excitotóxico en el sistema nervioso central. La variación o la expresión desregulada de GRIN2D se ha relacionado en la literatura con fenotipos del neurodesarrollo y asociados a convulsiones, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la señalización del glutamato y la función de redes neuronales.
NMDAε4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GRIN2D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GRIN2D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GRIN2D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GRIN2D alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.