Plásmido Doble Nickase (h) NMDAε3: sc-402942-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)NMDAε3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NMDAε3 (h) y el plásmido de doble nickasa NMDAε3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GRIN2C. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) NMDAε3 | sc-402942-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) NMDAε3 | sc-402942-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIN2C codifica la subunidad del receptor NMDA NMDAε3 (GluN2C), un componente de canal iónico activado por glutamato que se ensambla con NR1 y otras subunidades NR2 para regular la transmisión sináptica excitatoria. NMDAε3 contribuye a las propiedades biofísicas del receptor que determinan la entrada de calcio, la plasticidad sináptica y la expresión génica dependiente de la actividad, lo que la vincula a vías centrales del neurodesarrollo y de señalización sináptica. Mediante su acoplamiento a cascadas posteriores dependientes de Ca2+, como CaMK y programas de transcripción relacionados con CREB, GRIN2C influye en la maduración de las redes neuronales y la función de los circuitos. La alteración en la composición de subunidades del receptor NMDA y la desregulación de GRIN2C se han estudiado en el contexto de fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la neurotransmisión excitatoria.
NMDAε3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GRIN2C en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GRIN2C. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GRIN2C. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GRIN2C alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.