Nkx-2.5 Double Nickase Plasmid (h): sc-400276-NIC

NKX2-5 kodiert Nkx-2.5, einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der die Festlegung der kardialen Zelllinie und die Morphogenese koordiniert, indem er Genprogramme reguliert, die die Differenzierung von Kardiomyozyten, die Entwicklung des Reizleitungssystems und die Kammerbildung steuern. Er wirkt innerhalb zentraler kardialer Transkriptionsnetzwerke, an denen GATA-Faktoren, TBX-Proteine und MEF2 beteiligt sind, um während der Embryogenese und im adulten Myokard die Enhancer-Aktivität sowie kontextabhängige Chromatinzustände zu modulieren. Eine fehlregulierte NKX2-5-Aktivität oder Sequenzvarianten sind mit angeborenen Herzfehlern und arrhythmieassoziierten Phänotypen verknüpft, weshalb NKX2-5 häufig als Marker und mechanistischer Knotenpunkt für Untersuchungen der Kardiogenese und der kardialen Genregulationsschaltkreise genutzt wird. In Zellmodellen beeinflusst die Nkx-2.5-abhängige Transkription den Aufbau der Sarkomere, die elektrophysiologische Reifung sowie stressresponsive Remodeling-Signalwege, die für Entwicklungs- und Krankheitsbiologie relevant sind.

Nkx-2.5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NKX2-5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NKX2-5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NKX2-5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NKX2-5-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.