Plasmide Double Nickase (m) Nir2: sc-422251-NIC

Pitpnm1 code Nir2, une protéine de transfert du phosphatidylinositol qui contribue à l’homéostasie des phosphoinositides en échangeant des lipides entre membranes et en maintenant les réserves de phosphatidylinositol 4,5‑bisphosphate à la membrane plasmique. Dans les cellules de souris, Nir2 couple la signalisation de la phospholipase C induite par les récepteurs au réapprovisionnement lipidique au niveau des sites de contact réticulum endoplasmique–membrane plasmique, influençant la signalisation dépendante du calcium, le trafic membranaire et la dynamique du cytosquelette. Par son rôle dans la régulation du renouvellement des phosphoinositides, Nir2 contribue à des processus tels que la migration cellulaire, la croissance des neurites et le transport vésiculaire, sensibles aux flux de signalisation lipidique. La dérégulation du métabolisme des phosphoinositides et de la fonction des sites de contact membranaires est largement pertinente pour les études en neurobiologie, métabolisme et signalisation proliférative, offrant des points d’entrée mécanistiques pour des modèles de recherche orientés vers les maladies.

Nir2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pitpnm1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pitpnm1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pitpnm1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pitpnm1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.