Plasmide Double Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE: sc-404780-NIC

CHRNE code la sous-unité epsilon du récepteur nicotinique de l’acétylcholine (nAChR) de type musculaire, un canal cationique ligand-dépendant indispensable à la transmission synaptique rapide à la jonction neuromusculaire. L’incorporation de la sous-unité epsilon dans le pentamère du nAChR adulte permet l’ouverture du canal dépendante de l’acétylcholine, l’entrée de sodium et la dépolarisation de la plaque motrice, qui déclenche le couplage excitation–contraction. La fonction de CHRNE s’intègre aux voies de signalisation agrine–LRP4–MuSK, à l’élimination du neurotransmetteur régulée par l’acétylcholinestérase, ainsi qu’au regroupement et au renouvellement du récepteur dépendants de l’activité au niveau de la membrane postsynaptique. Des variants pathogènes de CHRNE sont associés à des syndromes myasthéniques congénitaux caractérisés par une transmission neuromusculaire altérée et une expression du récepteur ou des cinétiques d’ouverture/fermeture modifiées.

Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRNE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRNE. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRNE. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRNE.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.