Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND: sc-404001-ACT

CHRND code la sous-unité delta du récepteur nicotinique de l’acétylcholine (nAChR) de type musculaire, un canal ionique ligand‑dépendant qui s’assemble à la jonction neuromusculaire pour assurer une transmission synaptique rapide. Lors de la liaison de l’acétylcholine, le récepteur s’ouvre et permet l’entrée de cations, couplant la neurotransmission à la dépolarisation membranaire ainsi qu’aux processus d’excitation–contraction. CHRND contribue à l’assemblage du récepteur, au contrôle de l’ouverture du canal (gating) et à la stabilité postsynaptique au sein des voies de signalisation cholinergiques. Une composition ou une fonction altérée des sous-unités du nAChR est impliquée dans des troubles de la transmission neuromusculaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie synaptique et de la biogenèse des récepteurs.

Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHRND sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHRND dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHRND, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHRND natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND dans les cellules tumorales présentant une expression de CHRND silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.