Plásmido Doble Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1: sc-404205-NIC

CHRNB1 codifica la subunidad β1 del receptor nicotínico de acetilcolina (nAChR) de tipo muscular, un canal catiónico activado por ligando esencial para la transmisión sináptica rápida en la unión neuromuscular. Al incorporarse en complejos receptores pentaméricos, CHRNB1 contribuye a la apertura/cierre del canal dependiente de acetilcolina, a la despolarización de la membrana y al acoplamiento excitación–contracción que sustenta la activación del músculo esquelético. La señalización del nAChR se integra con la homeostasis iónica y con vías dependientes de la actividad que regulan el desarrollo muscular, la estabilidad sináptica y el recambio del receptor. La alteración genética o la disfunción de CHRNB1 se asocia con síndromes miasténicos congénitos y defectos relacionados de la transmisión neuromuscular, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos de la señalización sináptica y la fisiología muscular.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHRNB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHRNB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHRNB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHRNB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.