Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7: sc-416614-ACT

CHRNA7 code la sous-unité α7 du récepteur nicotinique de l’acétylcholine, un canal cationique homopentamérique activé par ligand qui médie une entrée rapide de Ca²⁺ en réponse à la signalisation cholinergique. Dans les neurones et les cellules immunitaires, l’activité du récepteur nicotinique α7 (α7 nAChR) influence l’excitabilité membranaire et des cascades de signalisation dépendantes du calcium, qui modulent la plasticité synaptique, la libération de neurotransmetteurs et des programmes transcriptionnels liés à la voie cholinergique anti-inflammatoire. La signalisation calcique régulée par CHRNA7 s’articule avec des processus associés à MAPK/ERK, JAK/STAT et NF-κB, affectant la production de cytokines et les réponses au stress cellulaire. Des variations génétiques et une expression altérée de CHRNA7 ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, et une signalisation cholinergique dérégulée est également étudiée dans des contextes d’inflammation et de neurodégénérescence.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHRNA7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHRNA7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHRNA7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHRNA7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 dans les cellules tumorales présentant une expression de CHRNA7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.