Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Double Nickase Plasmid (h): sc-401702-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Double-Nickase-Plasmid (h) und Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHRNA5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5: sc-376979
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401702-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401702-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRNA5 kodiert die akzessorische α5‑Untereinheit neuronaler nikotinischer Acetylcholinrezeptoren (nAChRs). Sie assembliert mit anderen α‑ und β‑Untereinheiten und moduliert dadurch das Gating des ligandengesteuerten Kationenkanals, die Ca²⁺‑Permeabilität sowie die Desensibilisierung des Rezeptors. Über cholinerge Signalübertragung beeinflussen α5‑haltige nAChRs die Membranexzitabilität und die Neurotransmitterfreisetzung und sind damit mit nachgeschalteten calciumabhängigen Signalwegen und Programmen der synaptischen Plastizität verknüpft. Genetische Variation und veränderte Expression von CHRNA5 wurden mit Nikotinabhängigkeit und rauchbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht und zudem im Kontext neuropsychiatrischer Merkmale sowie der für Rauchexposition relevanten Biologie des Atemwegsepithels untersucht. Als modulierende Untereinheit bietet CHRNA5 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um zu analysieren, wie die Rezeptorzusammensetzung die Funktion cholinerger Schaltkreise und stimulusabhängige transkriptionelle Antworten feinabstimmt.
Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHRNA5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHRNA5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHRNA5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHRNA5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.