Plásmido CRISPR de Activación (h) nicastrin: sc-402790-ACT

El gen humano **NCSTN** codifica nicastrina, una glicoproteína transmembrana de tipo I que actúa como subunidad esencial del complejo **γ-secretasa**, apoyando el reconocimiento de sustratos y la maduración de ensamblajes proteasa que contienen presenilina. A través de la actividad de la γ-secretasa, la nicastrina contribuye a la proteólisis intramembrana regulada de diversos sustratos, incluidos los receptores **NOTCH** y la **proteína precursora del amiloide**, vinculando a NCSTN con la señalización de Notch, las decisiones de destino celular y el recambio de proteínas de membrana. La alteración de componentes de la γ-secretasa puede modificar programas de diferenciación, la señalización inflamatoria y la proteostasis, lo que convierte a NCSTN en un nodo ampliamente estudiado en vías relevantes para la neurobiología, la homeostasis epitelial y la biología de la piel. La desregulación y las variantes de NCSTN se han asociado con trastornos que implican actividad aberrante de la vía de Notch y respuestas epidérmicas o inmunitarias alteradas, aportando un contexto mecanístico para estudios de genómica funcional.

nicastrin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NCSTN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

nicastrin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NCSTN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NCSTN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de nicastrin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NCSTN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de nicastrin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía nicastrin en células tumorales con expresión de NCSTN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.