NHE-6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404829

Descripción general

SLC9A6 codifica el intercambiador endosomal Na+/H+ NHE-6, un regulador clave del pH de los orgánulos y de la homeostasis iónica que favorece la maduración de los endosomas, el reciclaje de receptores y el tráfico vesicular. Al modular los gradientes de protones en la luz endosomal, NHE-6 influye en procesos como la señalización de factores de crecimiento, la clasificación de proteínas de membrana y las vías de degradación vinculadas a los lisosomas. En neuronas, la actividad de SLC9A6 está estrechamente relacionada con el desarrollo sináptico y el transporte intracelular, y su disfunción se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con discapacidad intelectual sindrómica ligada al cromosoma X. Estas características hacen de NHE-6 un punto de interés para estudiar la biología endosomal, la dinámica de la señalización y los mecanismos genotipo–fenotipo en modelos de células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NHE-6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC9A6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC9A6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC9A6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NHE-6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC9A6 para la investigación de la señalización de NHE-6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC9A6 críticos para la función de NHE-6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC9A6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NHE-6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NHE-6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC9A6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NHE-6 (h) y el plásmido HDR NHE-6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC9A6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC9A6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.