NHE-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404829
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- NHE-6 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico NHE-6, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:NHE-6 Anticorpo (2D5): sc-517111
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
NHE-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404829 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
SLC9A6 codifica o trocador endossomal Na+/H+ NHE-6, um regulador essencial do pH organelar e da homeostase iónica, que dá suporte à maturação de endossomas, à reciclagem de recetores e ao tráfego vesicular. Ao modular os gradientes de protões no lúmen, o NHE-6 influencia processos como a sinalização por fatores de crescimento, a triagem de proteínas de membrana e vias de degradação associadas aos lisossomas. Em neurónios, a atividade de SLC9A6 está intimamente ligada ao desenvolvimento sináptico e ao transporte intracelular, e a sua disfunção tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e a deficiência intelectual sindrómica ligada ao X. Estas características tornam o NHE-6 um alvo útil para estudar a biologia endossomal, a dinâmica de sinalização e os mecanismos genótipo–fenótipo em modelos de células humanas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NHE-6 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SLC9A6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SLC9A6, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SLC9A6 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NHE-6.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SLC9A6 para a investigação da sinalização de NHE-6, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SLC9A6 críticos para a função NHE-6
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SLC9A6 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo NHE-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NHE-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SLC9A6. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo NHE-6 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NHE-6 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SLC9A6 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SLC9A6 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.