Plásmido Doble Nickase (h) NHE-1: sc-400748-NIC

SLC9A1 codifica el intercambiador Na+/H+ NHE-1 de la membrana plasmática, un regulador clave del pH intracelular, el volumen celular y la homeostasis del sodio. Al expulsar protones a cambio de sodio extracelular, NHE-1 sostiene procesos sensibles al pH, como la remodelación del citoesqueleto, la dinámica de las adhesiones focales y la motilidad celular, y se integra con la señalización MAPK, las vías de GTPasas de la familia Rho y las redes de transporte iónico. La actividad de NHE-1 influye en la fisiología epitelial y cardíaca, la excitabilidad neuronal y las respuestas celulares al estrés osmótico y metabólico. La desregulación de la función de SLC9A1/NHE-1 se ha implicado en contextos como la biología del daño relacionado con isquemia, el remodelado asociado a la hipertensión, los fenotipos de invasión de células cancerosas y las respuestas al estrés neurodegenerativo, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos.

NHE-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC9A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC9A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC9A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC9A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.