Plásmido Doble Nickase (h) NGFR p75: sc-400552-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)NGFR p75 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NGFR p75 (h) y el plásmido de doble nickasa NGFR p75 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NGFR. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NGFR p75 Anticuerpo (B-1): sc-271708
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) NGFR p75 | sc-400552-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) NGFR p75 | sc-400552-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NGFR codifica el receptor de neurotrofinas p75 (NGFR p75), un miembro de la superfamilia de receptores del TNF que se une a neurotrofinas y proneurotrofinas para modular la supervivencia neuronal, la apoptosis, el crecimiento de neuritas y la remodelación sináptica. NGFR p75 funciona como un centro de señalización dependiente del contexto mediante interacciones con correceptores como los receptores Trk y sortilina, activando vías que incluyen NF-κB, JNK/c-Jun, la dinámica del citoesqueleto mediada por RhoA y la señalización por ceramida. Más allá del sistema nervioso, NGFR p75 influye en la biología de las células de Schwann, la regeneración axonal y los estados celulares derivados de la cresta neural. La desregulación de la señalización y la expresión de NGFR se ha asociado con procesos neurodegenerativos, respuestas a lesiones nerviosas y la plasticidad e invasividad de células tumorales en diversos contextos relevantes para el cáncer, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos.
NGFR p75 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NGFR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NGFR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NGFR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NGFR alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.