Plásmido Doble Nickase (h) NG2: sc-400699-NIC

CSPG4 codifica el proteoglicano transmembrana de condroitín sulfato NG2, un correceptor multifuncional que modula las interacciones célula–matriz y la señalización de factores de crecimiento. NG2 influye en la remodelación del citoesqueleto, la adhesión y la migración a través de vías vinculadas a la señalización de integrina/FAK, PDGF y MAPK/ERK, favoreciendo fenotipos celulares proliferativos e invasivos. En tejidos humanos, la expresión de CSPG4/NG2 se asocia con estados tipo progenitor y con programas perivasculares o estromales, y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología tumoral, la remodelación angiogénica y los mecanismos de resistencia a terapias. Por ello, la señalización desregulada de NG2 y su interacción con la matriz extracelular son relevantes para la investigación sobre la progresión maligna, la dinámica del nicho vascular y la plasticidad impulsada por el microambiente.

NG2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CSPG4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CSPG4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CSPG4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CSPG4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.