Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO NF-L (h): sc-402254
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- NF-L Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique NF-L, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NF-L Antibody (8A1): sc-20012
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO NF-L (h) | sc-402254 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
NEFL code la chaîne légère des neurofilaments (NF‑L), une protéine clé de filament intermédiaire qui s’assemble avec NEFM et NEFH pour former le cytosquelette neuronal et maintenir le calibre axonal ainsi que la stabilité mécanique. NF‑L participe au transport et à l’organisation des neurofilaments, influençant le trafic axonal, la dynamique du cytosquelette et la connectivité neuronale à longue distance. Une altération de la fonction de NEFL perturbe l’assemblage des neurofilaments et l’intégrité axonale, reliant les voies de stress du cytosquelette à une dysfonction neuronale progressive. Des variants et une homéostasie modifiée de NF‑L sont associés à des neuropathies héréditaires et à des processus neurodégénératifs dans lesquels la structure et le transport axonaux sont compromis.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NF-L (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NEFL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NEFL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NEFL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NF-L.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NEFL pour l'étude de la signalisation de NF-L, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de NEFL essentiels à la fonction de NF-L
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NEFL pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le NF-L plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NF-L plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NEFL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le NF-L plasmide HDR (h) et le NF-L (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NEFL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NEFL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.