Plásmido Doble Nickase (m) neuropilin-1: sc-421964-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)neuropilin-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa neuropilin-1 (m) y el plásmido de doble nickasa neuropilin-1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Nrp1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: neuropilin-1 Anticuerpo (A-12): sc-5307
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) neuropilin-1 | sc-421964-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Nrp1 de ratón codifica la neuropilina-1, un correceptor multifuncional que modula la señalización de las semaforinas de clase 3 y de ligandos de la familia VEGF para coordinar la guía axonal, la angiogénesis y el desarrollo linfático y cardiovascular. La neuropilina-1 se integra con los complejos VEGFR2/FLT1 y con complejos de plexinas para modelar las dinámicas citosqueléticas dependientes de MAPK/ERK, PI3K–AKT y de las GTPasas Rho, influyendo en la migración, la adhesión y la permeabilidad vascular. En los compartimentos inmunitario y estromal, NRP1 contribuye a la comunicación célula–célula y a la remodelación tisular mediante efectos sobre la biología de las células dendríticas y de las células T reguladoras, así como sobre las interacciones con la matriz extracelular. La señalización desregulada de NRP1 se asocia con neovascularización patológica, remodelación tisular impulsada por la inflamación y procesos del microambiente tumoral, lo que la convierte en un nodo relevante para estudios mecanísticos de vías vasculares y de guiado.
neuropilin-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Nrp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Nrp1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Nrp1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Nrp1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.