Plásmido CRISPR de Activación (h) neuroligin 2: sc-402250-ACT

El gen humano NLGN2 codifica neuroligina 2, una proteína postsináptica de adhesión celular enriquecida en sinapsis inhibitorias, donde coordina la especificación, la maduración y la neurotransmisión sinápticas al acoplarse a las neurexinas y a complejos de andamiaje como la gefirina. A través de estas interacciones, la neuroligina 2 influye en el ensamblaje sináptico GABAérgico, el agrupamiento de receptores y el equilibrio entre excitación e inhibición, moldeando la sincronía y la plasticidad de las redes. La desregulación de la expresión de NLGN2 o de su localización sináptica se ha asociado con alteraciones en la función de los circuitos inhibitorios implicadas en fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, incluidos el trastorno del espectro autista, la esquizofrenia y conductas relacionadas con la ansiedad. Como organizador sináptico, NLGN2 se estudia con frecuencia en vías que gobiernan la conectividad de interneuronas, la estabilidad de las sinapsis inhibitorias y la remodelación dependiente de la actividad.

neuroligin 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NLGN2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

neuroligin 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NLGN2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NLGN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de neuroligin 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NLGN2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de neuroligin 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía neuroligin 2 en células tumorales con expresión de NLGN2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.