Plasmide CRISPR/Cas9 KO NELF-B (h): sc-405667

Présentation

NELFB code pour NELF-B, une sous-unité essentielle du complexe NELF (negative elongation factor), qui coopère avec DSIF pour réguler la pause proximale au promoteur de l’ARN polymérase II et coordonner l’élongation productive de la transcription. Par le biais de ce point de contrôle, NELF-B influence des programmes d’expression génique rapides et sensibles aux stimuli, la maturation co‑transcriptionnelle des ARN, ainsi que le contrôle, lié à la chromatine, de la cinétique transcriptionnelle. La pause dépendante de NELF-B s’intègre à des voies de signalisation et de réponse au stress qui ajustent finement la production transcriptionnelle et les transitions d’état cellulaire. La dérégulation du contrôle de l’élongation et des réseaux associés à la pause a été impliquée dans des programmes transcriptionnels oncogéniques et d’autres maladies caractérisées par une régulation génique altérée, faisant de NELFB un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NELF-B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NELFB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NELFB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NELFB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NELF-B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NELFB pour l'étude de la signalisation de NELF-B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NELFB essentiels à la fonction de NELF-B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NELFB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NELF-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NELF-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NELFB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NELF-B plasmide HDR (h) et le NELF-B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NELFB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NELFB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.