Nek2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421853

Descripción general

Nek2 (quinasa 2 relacionada con NIMA) es una quinasa de serina/treonina que se localiza en los centrosomas y regula la separación de los centrosomas, el ensamblaje del huso y la segregación fiel de los cromosomas durante la mitosis. En células de ratón, la actividad de Nek2 coordina la progresión del ciclo celular al fosforilar sustratos centrosomales y modular la dinámica de los microtúbulos, contribuyendo a la estabilidad del genoma. La señalización desregulada de Nek2 se ha asociado con la amplificación de centrosomas, la aneuploidía y un control proliferativo alterado, lo que la hace relevante para estudios de biología tumoral y de la integridad del punto de control mitótico. Nek2 también se interseca con vías que gobiernan las respuestas al daño del ADN y la dinámica ciliar, lo que respalda su uso como un nodo para diseccionar redes de señalización vinculadas a la división celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nek2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nek2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nek2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nek2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nek2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nek2 para la investigación de la señalización de Nek2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Nek2 críticos para la función de Nek2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nek2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nek2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Nek2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nek2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nek2 (m) y el plásmido HDR Nek2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nek2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nek2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.