NEDL2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-410607-LAC

Das humane HECW2-Gen kodiert NEDL2, eine E3-Ubiquitin-Protein-Ligase vom HECT-Typ, die die Proteostase reguliert, indem sie die Übertragung von Ubiquitin auf spezifische Substrate katalysiert und dadurch deren Stabilität, Lokalisation und Signaloutput beeinflusst. NEDL2 ist an der Steuerung der neuronalen Entwicklung und synaptischen Funktion beteiligt, und zwar über eine ubiquitinabhängige Modulation von Signalwegen, die den Proteinumsatz, die Zytoskelettdynamik und Transkriptionsprogramme kontrollieren. Störungen von HECW2/NEDL2 wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was es zu einem relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung macht, wie Ubiquitinierung zelluläre Signalnetzwerke prägt. In der biomedizinischen Forschung bietet HECW2 einen mechanistischen Zugang, um ubiquitinvermittelte Regulation in neuronalen und anderen Zellkontexten zu untersuchen, einschließlich nachgeschalteter Effekte auf Genexpression und Stressantwort-Schaltkreise.

NEDL2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HECW2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NEDL2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HECW2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NEDL2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HECW2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.