Plásmido Doble Nickase (h) NDUFB5: sc-410902-NIC

NDUFB5 codifica una subunidad accesoria del complejo I de la cadena respiratoria mitocondrial (NADH:ubiquinona oxidorreductasa) que contribuye al ensamblaje adecuado del complejo y a la transferencia de electrones desde el NADH a la ubiquinona. A través de su función en la fosforilación oxidativa, NDUFB5 influye en el mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial, la producción de ATP y el equilibrio redox celular, con efectos posteriores sobre la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno. La alteración de la función del complejo I se asocia con estrés bioenergético mitocondrial, reprogramación metabólica y vulnerabilidades en tejidos con alta demanda energética, lo que convierte a NDUFB5 en un nodo relevante para estudiar la disfunción mitocondrial. La investigación sobre NDUFB5 suele intersectar con vías que regulan la proteostasis mitocondrial, la mitofagia y las respuestas de señalización núcleo–mitocondria frente a una respiración comprometida.

NDUFB5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NDUFB5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NDUFB5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NDUFB5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NDUFB5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.