NDUFB5 Plasmide Double Nickase (h): sc-410902-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NDUFB5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NDUFB5 Double Nickase Plasmid (h) e il NDUFB5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NDUFB5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NDUFB5 Antibody (F-2): sc-514245
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NDUFB5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410902-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NDUFB5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410902-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NDUFB5 codifica una subunità accessoria del complesso I della catena respiratoria mitocondriale (NADH:ubichinone ossidoreduttasi) che contribuisce al corretto assemblaggio del complesso e al trasferimento di elettroni dal NADH all’ubichinone. Attraverso il suo ruolo nella fosforilazione ossidativa, NDUFB5 influenza il mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale, la produzione di ATP e l’equilibrio redox cellulare, con effetti a valle sull’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. Un’alterata funzione del complesso I è associata a stress bioenergetico mitocondriale, riprogrammazione metabolica e vulnerabilità nei tessuti ad alta richiesta energetica, rendendo NDUFB5 un nodo rilevante per lo studio della disfunzione mitocondriale. La ricerca su NDUFB5 spesso si intreccia con vie che controllano la proteostasi mitocondriale, la mitofagia e le risposte di segnalazione nucleo–mitocondrio alla respirazione compromessa.
NDUFB5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NDUFB5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NDUFB5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NDUFB5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NDUFB5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.